Estudio de la mutación V617F del gen Jak2

La policitemia vera (PV), la trombocitemia esencial (TE) y la mielofibrosis idiopática (MI) son trastornos mieloproliferativos clonales estrechamente relacionados y caracterizados por una proliferación excesiva de una o más líneas mieloides tales como eritrocitos, plaquetas y fibroblastos de la médula ósea. En el año 2005, se identificó en varias de estas entidades una mutación en el exón 14 del gen tirosina quinasa Janus kinase 2 (JAK2). Esta mutación consiste en la sustitución de una G por una T en la posición 1849, resultando en la sustitución en la proteína de una fenilalanina por valina (JAK2 V617F).

La presencia de JAK2 V617F ha sido reportada en la mayoría de los pacientes con desórdenes mieloproliferativos, la misma puede ser detectada en el 95% de los casos de PV,  y en la mitad de los casos de TE o MI. La identificación reciente de  esta mutación activadora en el gen JAK2 representa un importante avance en el conocimiento de la patogenia de los síndromes mieloproliferativos BCR-ABL negativos. Debido a la alta frecuencia en que esta mutación es encontrada en la PV y en menor grado en la TE y la MI, se ha postulado que la detección de esta mutación tendría un fuerte impacto en el diagnóstico, la clasificación y el tratamiento de estas entidades.

Existe información discordante sobre la prevalencia de JAK2 V617F en casos de PV, TE y MI principalmente debido a diferencias en la sensibilidad y especificidad de las diferentes técnicas disponibles para su estudio, razón por la cual en nuestro laboratorio de Biología Molecular se realizó un  trabajo para comparar tres técnicas para el estudio de JAK2 V617F como son la secuenciación, ARMS PCR y la nueva técnica  de High Resolution Melting (HRM).

La técnica de HRM se desarrolló como una extensión de los análisis de la curva de disociación (o "fusión") del ADN que se lleva a cabo en los aparatos de PCR en Tiempo Real convencionales. Se utiliza para caracterizar las muestras de ADN de acuerdo con su comportamiento de disociación en la transición a partir del ADN de doble cadena a ADN de cadena sencilla al aumentar la temperatura. Un instrumento de HRM recoge señales fluorescentes con mucha mayor precisión óptica y térmica que los instrumentos de PCR en Tiempo Real standard. Es una tecnología de gran utilidad para la detección de mutaciones, polimorfismos y variantes epigenéticas en muestras de ADN de doble hebra. Entre las mutaciones que se pueden detectar con este análisis se encuentran: polimorfismos de nucleótido simple (SNPs) , mutaciones nuevas, o incluso discriminar una variante de ADN mutado minoritario en una muestra con predominio de la secuencia salvaje. El HRM es un método simple y económico que no requiere ensayos post-PCR. 

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Estudio de mutaciones en el exón 12 del gen jak2

La patogénesis molecular de aquellos pacientes con desórdenes mieloproliferativos negativos para la mutación es poco clara, se ha reportado que aquellos pacientes que carecen de la mutación V617F, poseen mutaciones adquiridas en el exon 12 del gen Jak2. En el laboratorio se está trabajando para desarrollar una metodología para la detección de mutaciones en el exón 12 del gen jak2.

Determinación disponible en Instituto de Análisis Fares Taie:  

Autor: Dra. Silvina Quintana - Jefa Área Bióloga Molecular - Fares Taie Instituto de Análisis

Contacto: biologiamolecular@farestaie.com.ar

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